没有人提议吃饭。
所有人,接力完成每一个步骤。
晚上八点。
五十份样本的neta全部准备就绪。
最关键的一步到来了。
“准备上qpcr机。”江河说。
易向晚和顾亦舟将配制好的pcr反应体系小心翼翼地加入96孔板中。
每一个孔里,都包含着引物、荧光染料、neta模板和酶。
这套体系,是他们之前在1万倍稀释的极端低浓度下拉出来的。
江河拿起96孔板,放入qpcr仪的反应槽中。
压下盖子。
输入参数。
设定循环程序。
“开始运行。”
机器启动。
检测过程需要两个小时。
这两个小时,对实验室里的每一个人来说,都如同世纪般漫长。
如果扩增曲线是一条平滑的直线,没有起伏,说明患者在两三年前的血液中,并没有这些特异性mirna的异常表达。
那就意味着,早筛模型失败。
如果曲线能漂亮地拉起来,并且ct值(循环阈值)在有效范围内,则证明模型成立。
江河拉过一把椅子,坐在电脑前。
他不说话,其他人也不敢说话。
易向晚在操作台边走来走去。
“你别晃了。”顾亦舟烦躁地说。
“我紧张啊师兄,万一……我是说万一,欧洲那边的血清变质了怎么办?或者我们找的那些标志物其实在极早期根本不释放?”
“闭嘴。”所有人一起打断了他。
易向晚赶忙举手:“抱歉!”
第一阶段的变性、退火、延伸循环结束。
屏幕上依然是一片空白。
“怎么还没出线?”陆晓林手心已经出汗了。
蔡卓群沉声说道:“急什么,极早期的样本,浓度低,ct值肯定靠后。”
第三十个循环。
依然没有明显起伏。
第三十二个循环。
突然。
屏幕的坐标轴上,第一条曲线的尾部,出现了一个上扬角度。
所有人屏息。
第三十三个循环。
上扬的角度开始变大。
紧接着,第二条、第三条、第五条曲线……
第三十五个循环。
屏幕上爆出密集的扩增曲线!
一条条平滑的对数扩增曲线,拔地而起!
没有任何杂乱的非特异性扩增!
而在另一侧的熔解曲线界面上,更是拉出了漂亮整齐的单峰!
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