加入氯仿,剧烈震荡十五秒,再次静置。
“上离心机。”
“4摄氏度,12ooog,15分钟。”
离心机启动。
这十五分钟里,没有人说话。
易向晚盯着离心机上的倒计时,咽了一口唾沫。
程溪瑶和唐培在检查下游的pcr反应液。
“滴——”
倒计时结束。
江河取出离心管。
液体已经清晰地分成了三层。
最上层是无色的水相,含有他们需要的rna。
“开始双重氯仿抽提。”
这正是他之前解决纯度问题的核心技术。
小心地吸取上清液,移入新管。
牺牲了一部分液量以避开中间层的蛋白质污染。
接着,再次加入等体积的氯仿,震荡,离心。
第二次离心结束,江河再次吸取上清液。
“糖原。”
江河伸出手。
王晓晴立刻将准备好的糖原递上。
往水相里滴入5微升浓度为5mgm1的糖原作为共沉淀剂。
“异丙醇沉淀,负2o度静置二十分钟。”
二十分钟后,再次离心。
倒掉上清液,管底出现了一个微小的白色沉淀团块。
“洗涤。”
加入75%乙醇,温和洗涤,离心,弃液。
“风干,加无酶水溶解。”
整个提取过程耗时将近两个小时。
第一批五个样本的rna提取完成。
江河拿着溶解后的样本,走到nanodrop分光光度计前。
滴入1微升样本,放下检测臂。
所有人都围了过来。
屏幕上跳出数据:
浓度:15ngμ1。
a26o28o:1.95。
a26o23o:2.o3。
极度纯净的数据。
经历了跨国运输和反复冻融,他们依然靠这套提取工艺拿到了完美的样本。
“提取成功。”江河淡淡地说了一句,“按这个标准,把剩下的样本全部提出来,王教授,准备逆转录。”
“收到。”王晓晴立刻接过样本,走向另一边的操作台。
逆转录过程相对自动化。
利用特定的茎环引物,将极其微量的mirna逆转录成neta。
时间一分一秒地过去。
窗外的天色逐渐暗了下来。
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